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无内毒素快速质粒超大量提取试剂盒(Mega 10)
供应商 嘉兴蓝诺盛生物科技有限公司
最小起订数 1
出口地区 全球
更多信息 
 
产品详情 字体:
试剂盒组分:
 
Catalog  #
PD1624-01
Preps
2
DNA Unit
2
Filter Unit
2
Replacement Cup
4
Buffer A1
220 mL
Buffer B1
220 mL
Buffer N3
70 mL
Buffer KB
110 mL
Buffer RET
440 mL
RNase A (20 mg/mL)
22 mg(1.1 mL)
Endofree Elution Buffer
60 mL
User Manual
1
 
保存条件:
 
RNAse A在4℃下可以保存一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它组分室温保存。
 
注意事项:
  1. 质粒拷贝数:纯化中低拷贝的质粒时,使用2倍的菌液体积,2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇,相同体积的Wash Buffer (70% 乙醇)和Endofree Elution Buffer。
  2. 转化菌: 若为-70℃甘油冻存的菌,请先涂布平板培养后,再重新挑选新的单个菌落进行培养。
  3. 切勿直接取冻存在4℃的菌进行培养。
  4. 杯结合能力:10 mg
操作简明步骤:
  1. 取500 µL新鲜的菌液接种到 1,200-1,500 mL (勿超过 500 mL)的LB培养基(含适量抗生素),37oC震荡培养14-16小时。室温下5,000 x g离心10分钟,收集菌体,并尽可能的吸去上清。
  2. 加入100 mL Buffer A1(确保已加入RNase A),用移液器或涡流震荡确保细菌沉淀重新悬浮。
  3. 加入 100 mL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀,然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。 
  4. 加入30 ml Buffer N3, 立即反转几次至出现絮状白色沉淀。涡漩震荡10 秒。充分混匀后,溶液将会变的  颜色均一,如果此时溶液颜色不均一,均局部颜色过深,建议将溶液轻甩几次,以充分混合溶液,
  5. 将双层Filter unit与500 mL或1000 mL的灭菌瓶(Corning# 430518 or  430282 or equivalent) 连接,旋紧,再将此装置与真空负压装置连接。
  6. 先将步骤“5”中底部较澄清的裂解产物转移至双层Filter unit中,静置5分钟后打开真空装置,使负压由低到高,5分钟后增至最大(0.04 Mpa)
  7. 当大部分裂解液已被过滤时,关掉真空负压装置,等候1分种,拆卸装置,移去双层Filter unit。
  8. 再将DNA unit杯与一个新的灭菌的500 mL或1000 mL的灭菌螺口标准瓶连接,旋紧。并将过滤嘴与真空负压装置连接。在步骤“7”中收集到的裂解液中加入1倍体积的Buffer RET (如220 mLBuffer RET加入220 mL的上清液中), 120 mL100%乙醇,立即混合均匀,立即将一半倒入DNA unit杯中,开启负压装置,进行过滤吸附操作。
  9. 再将剩下一半倒入DNA unit杯中,当所有裂解液已过滤完,再维持真空1分钟后,关掉负压装置。
  10. 向DNA Unit杯中加入50 mL Buffer KB,最大负压(0.04Mpa)1分钟,使液体完全通过DNA Unit 杯。
  11. 在DNA Unit杯中加入50 mL 70%乙醇,最大负压(0.04Mpa)1分钟,使乙醇完全通过DNA Unit杯。重复此操作步骤一次。
  12. 在DNA Unit杯中加入80 mL无水乙醇,最大负压1分钟,关掉负压装置,倒掉瓶子中的废液,将DNA Unit杯重新连接至标准瓶上,开启负压装置至最大负压,真空抽20分钟,以充分去除残留的乙醇。
  13. 关掉负压装置,静置一分钟,移去标准瓶,将DNA Unit 连接至一个新的50 mL的离心管中,并旋紧。
  14. 加入20 mL Endofree Elution Buffer 到DNA Unit杯的膜上,室温放置2分钟,打开负压装置至最大(0.04 Mpa)洗脱DNA。此时会收集到10~12 mL洗脱液,这是1st 洗脱液。
  15. 关掉负压装置,将DNA Unit连接至一个新的50 mL的离心管中,加入5 mL Endofree Elution Buffer 到DNA Unit杯的膜上,室温静置2分钟,开启负压装置至最大(0.04 Mpa)洗脱DNA。此时会收集到约2~4 mL洗脱液,这是2nd洗脱液。

操作流程

        

 
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